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支持與應(yīng)用
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干貨分享—流動(dòng)相含緩沖液時(shí)如何維護(hù)色譜柱
發(fā)布時(shí)間：
2020-03-18
（一）液相分析中常用緩沖鹽的原因
反相液相色譜分析中，流動(dòng)相的PH值一般在2.5-7之間，當(dāng)被分析物在反相條件下可離解，或樣品的PH值在2.5-7之外時(shí)，就需要由緩沖鹽配制的緩沖液體系。在反相條件下可離解的化合物一般都有氨基和羧基，他們的Pka在1-11之間，選擇正確的緩沖液PH值可保證可離解的官能團(tuán)以一種形式存在，離子形式或中性化合物的形式。如果樣品的PH值對(duì)柱子有傷害，則緩沖溶液可使其變溫和從而減小其危害。
對(duì)于分析結(jié)果來(lái)說(shuō)，不恰當(dāng)?shù)腜H值可能導(dǎo)致不對(duì)稱峰，寬峰，分裂峰或肩峰，而尖銳的，對(duì)稱的峰是定量分析中獲得低的檢測(cè)限以，兩次分析之間較低的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)和保留時(shí)間的高重現(xiàn)性的前提。正確選擇緩沖溶液在反相液相色譜方法中對(duì)于優(yōu)化尖峰，檢出限，以及獲得穩(wěn)定的保留時(shí)間十分重要。但是，如果操作過(guò)程不當(dāng)，會(huì)對(duì)色譜柱造成嚴(yán)重傷害！
所以，緩沖鹽的使用，有利也有弊。
（二）、緩沖鹽使用不當(dāng)帶來(lái)的后果
緩沖鹽的不當(dāng)使用對(duì)色譜柱可能造成柱壓升高、柱效下降以及使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化等影響。
柱壓升高
原因：緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動(dòng)相傳質(zhì)，引起柱壓升高。
柱效下降
原因有二：
1.有些緩沖鹽會(huì)滲入到鍵合相的深處，損害硅膠基體，導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失，柱床變松，柱效下降；
2.緩沖鹽凝結(jié)在鍵合相表面，使C18碳鏈難以舒展，對(duì)物質(zhì)的保留能力下降，導(dǎo)致柱效下降。
保留時(shí)間發(fā)生變化
原因：如果沒(méi)有沖洗干凈就進(jìn)行下次進(jìn)樣，色譜柱內(nèi)含有的鹽會(huì)使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化。
（三）色譜柱維護(hù)
色譜柱內(nèi)含有的流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí)，大的原則是：使用前要過(guò)渡，使用后要清洗（清洗包括兩個(gè)步驟，一個(gè)步驟是用來(lái)清洗緩沖鹽，另一個(gè)步驟是用來(lái)清洗強(qiáng)保留物質(zhì)的），具體請(qǐng)按如下方式保養(yǎng)色譜柱：
1、使用前的過(guò)渡：
用乙腈：水＝10：90（如果是甲醇體系則用甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速過(guò)渡30min（目的是防止緩沖鹽在進(jìn)入柱子時(shí)析出）；
理由：緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。
用含緩沖鹽的（特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí)）流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí)，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對(duì)較小，不先沖洗掉，接下來(lái)做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機(jī)溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí)，緩沖鹽將會(huì)在色譜柱柱體上析出，沉積下來(lái)，這將可能導(dǎo)致對(duì)色譜柱的損害。
2、一天分析完成后，即使用后的清洗：
1）用乙腈：水＝10：90（或甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速反向沖洗45min（目的是洗去緩沖鹽，防止緩沖鹽在色譜柱內(nèi)存留引起使用壽命下降）；
2）再用乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）1ml/min流速反向沖洗45min，（目的是洗去分析過(guò)程中積累的強(qiáng)保留物質(zhì)，防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱內(nèi)進(jìn)一步積累，影響以后的分析，也防止強(qiáng)保留物質(zhì)的積累導(dǎo)致的柱壓升高），然后色譜柱保存在乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）中；
3、如果做完一種化合物，緊接著要做另外一種化合物，由于流動(dòng)相等條件不同，則請(qǐng)先按步驟2清洗色譜柱，再使用色譜柱；要是接下來(lái)做的樣品的流動(dòng)相里也含有緩沖鹽，也請(qǐng)?jiān)诓襟E2清洗過(guò)后再按步驟1的方式來(lái)過(guò)渡。
1）乙腈：水＝10：90或甲醇：水＝10：90容易長(zhǎng)菌，溫度越高越容易長(zhǎng)菌，實(shí)驗(yàn)表明，在28度條件下保存至第5天時(shí)發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)菌，不宜多配。