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2025-04-10
2025-04-10
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HPLC中常用的定量分析方法
發(fā)布時(shí)間：
2025-04-10
HPLC的定量分析
在液相色譜中，定量分析一直是分析化學(xué)的核心任務(wù)之一。無(wú)論是藥品研發(fā)、食品安全檢測(cè)，還是環(huán)境監(jiān)測(cè)，準(zhǔn)確的定量結(jié)果都是我們追求的目標(biāo)。但即使是同一臺(tái)儀器、同一個(gè)樣品，選錯(cuò)定量方法也可能讓實(shí)驗(yàn)結(jié)果天差地別。在中國(guó)藥典2020版第三部通則中介紹了五種常用的定量分析方法，本篇推文將展示五種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，以便于各位在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中更好選擇。
01 外標(biāo)法——簡(jiǎn)單直接
原理：
通過(guò)配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)量它們的色譜峰面積或峰高，然后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品中的待測(cè)組分濃度可以通過(guò)其峰面積在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找到對(duì)應(yīng)的值。
優(yōu)點(diǎn)：
操作簡(jiǎn)單，無(wú)需復(fù)雜的前處理，計(jì)算方便。
適合大量樣品的快速分析。
缺點(diǎn)：
對(duì)進(jìn)樣量的重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)條件的穩(wěn)定性要求較高。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性直接影響定量結(jié)果。
適用場(chǎng)景：
主成分含量測(cè)定（如藥品有效成分）
樣品基質(zhì)簡(jiǎn)單、干擾少的情況
tips：
標(biāo)準(zhǔn)品濃度需覆蓋樣品可能的濃度范圍
定期復(fù)標(biāo)，避免儀器漂移影響結(jié)果（建議每10針插入1針標(biāo)樣）
02 內(nèi)標(biāo)法——高精度
原理：
在樣品和標(biāo)樣中加入內(nèi)標(biāo)物（與待測(cè)組分性質(zhì)相似但能完全分離），通過(guò)比較內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積比值，結(jié)合內(nèi)標(biāo)物的已知量，計(jì)算待測(cè)組分的含量。
優(yōu)點(diǎn)：
抗干擾能力強(qiáng)，能夠有效抵消因進(jìn)樣量變化、儀器漂移等產(chǎn)生的影響。
定量結(jié)果更準(zhǔn)確。
缺點(diǎn)：
需要篩選合適的內(nèi)標(biāo)物，操作相對(duì)復(fù)雜。
適用場(chǎng)景：
復(fù)雜基質(zhì)樣品（如血藥濃度檢測(cè)）
前處理步驟多、回收率不穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)
03 面積歸一化法——快速篩查
原理：
歸一化法（面積歸一法）是將所有色譜峰面積之和視為100%，通過(guò)計(jì)算各組分峰面積占總峰面積的比例來(lái)定量。這種方法假設(shè)樣品中所有組分均被檢測(cè)且峰面積與含量成正比。
優(yōu)點(diǎn)：
操作簡(jiǎn)便，不依賴于標(biāo)準(zhǔn)品。
適合樣品中各組分已知且峰面積與含量成線性關(guān)系的情況。
缺點(diǎn)：
無(wú)法校正儀器響應(yīng)的差異，誤差可能很高。
對(duì)樣品的完全分離要求較高。
適用場(chǎng)景：
粗略估算樣品純度
快速篩查未知樣品中的主要成分
tips：
僅適用于同類型化合物（如合成中間體混合物），紫外吸收差異大的組分需謹(jǐn)慎使用
04 加校正因子的主成分自身對(duì)照法
原理：
通過(guò)測(cè)定雜質(zhì)與主成分的校正因子，將雜質(zhì)的峰面積乘以校正因子后，與主成分的峰面積進(jìn)行比較。
優(yōu)點(diǎn)：
考慮了雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子差異，定量更準(zhǔn)確。
適合已知雜質(zhì)的定量分析。
缺點(diǎn)：
需要預(yù)先測(cè)定校正因子，操作相對(duì)復(fù)雜。
適用場(chǎng)景：
已知雜質(zhì)且已測(cè)定校正因子的藥品有關(guān)物質(zhì)檢查
需要精確測(cè)定雜質(zhì)含量，且雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子差異較大時(shí)
05 不加校正因子的主成分自身對(duì)照法
原理：
不需要雜質(zhì)對(duì)照品，假設(shè)雜質(zhì)與主成分響應(yīng)因子相同，通過(guò)比較雜質(zhì)峰面積與主成分峰面積，直接計(jì)算雜質(zhì)含量。
優(yōu)點(diǎn)：
操作簡(jiǎn)單，不需要雜質(zhì)對(duì)照品。
適合快速篩查雜質(zhì)。
缺點(diǎn)：
忽略了雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子差異，可能導(dǎo)致定量誤差。
適用場(chǎng)景：
未知雜質(zhì)或校正因子未確定的初步篩查
沒(méi)有雜質(zhì)對(duì)照品，且需要快速篩查雜質(zhì)時(shí)
總結(jié)
液相色譜的定量分析方法各有千秋，沒(méi)有絕對(duì)的“最好”，只有最適合的方法。希望今天的分享能幫助你更好地選擇適合的定量方法，讓每一次分析都更加精準(zhǔn)！
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